细胞永生化检测 细胞永生化服务 细胞永生化 细胞永生化服务-飞凡检测张同学

飞凡检测细胞永生化服务介绍

细胞永生化(CellsImmortalization)是指体外分离培养的原代细胞经过自发的或受外界因素的影响从增殖衰老危机中逃离，从而具有无限增殖能力的过程。正常组织

来源的原代细胞在通常的体外培养条件下可分裂生长，但经过有限次数的传代后，就会停止增殖，发生衰老和死亡。利用基因转染等技术将外源性永生化基因导入目的细胞内，从而建立永生化细胞株，以达到使体外培养的细胞具有无限增殖能力且细胞间无差异的目的。对细胞永生化进行深入研究，不仅有利于对细胞增殖与衰老的分子机制了解，而且为探寻肿瘤治疗及器官移植的研究莫定了坚实的基础。此外，由于永生化细胞具有可以多次传代的特性，可以利用各种细胞永生化的方法使那些传代困难 增殖缓慢、容易衰老的细胞获得永生，从而为研究人员提供更多的细胞资源。

细胞永生化构建方法。(1)使用SV40T基因，诱导细胞不朽化。SV40的T抗原诱导不同类型的细胞不朽化，在许多文献中己证实此方法为简单目可靠的方法，其机制一直都有详细记载。(2)大多数体细胞的端粒缩短至关键长度，就会发生细胞生长障碍或细胞衰老:肿瘤细胞因有端粒酶活性而使其具有无限分裂的能力。人类催化亚基端粒酶逆转录酶(human telomerase reversetranscriptase，hTERT)是端粒酶的限速成分，仅在端粒酶阳性的细胞中表达，与端粒酶活性相关。研究发现，hTERT共转染P53或 pRBsiRNA可以使人类细胞，原代细胞，卵巢细胞，及上皮细胞永生化。

细胞永生化:体外培养细胞经过自发的或受外界因素的影响而从增殖危机中逃逸，细胞获得持续生长增殖能力的特性永生化的细胞具有无限增殖生长性，可长期传代，并多伴有核型改变。

原代细胞永生化后即获得无限增殖的能力，但它们没有恶性转化的表型特征，即不能在软琼脂上形成克隆(锚着独立性生长)，也不能在裸鼠皮下成瘤。如果细胞在永生化的基础上发生更多的分子突变事件如癌基因的活化、抑癌基因的失活、表观遗传突变等，这些突变在细胞中不断累积，达到一定的负荷时，细胞就可能发生恶性转化，因此细胞永生化实际上可以看作是细胞转化前的一个特殊阶段。

目前普遍认为细胞永生化是细胞恶性转化的必经阶段，因为所有的肿瘤细胞都具备无限分裂的特性。

也就是说永生化细胞有可能是肿瘤细胞的前奏，它和肿瘤细胞都是无限增殖的，但是永生化细胞无成瘤性，肿瘤细胞有成瘤性质，它们在癌基因的活化、抑癌基因的失活、表观遗传突变等方面分子方面应该有很多不同。

永生化细胞和肿瘤细胞:虽然二者均可无限增殖，永生化细胞没有肿瘤具有的浔润性和转移性。

细胞永生化(cell immortalization) 指体外培养的细胞经过自发的或受外界因素的影响从增殖衰老危机中逃离, 从而具有无限增殖能力的过程. 自发永生化的几率非常小, 啮齿类动物为10-5~10-6, 而人类细胞则更为罕见, 小于10-12. 通过基因转染等技术将外源性永生化基因, 如病毒、原癌基因和抑癌基因突变体等, 导入目的细胞内, 以增加永生化的发生率, 进而建立永生化细胞株(immortalized cell strains), 以达到使体外培养的细胞具有无限 增殖能力且细胞间无差异的目的。

细胞永生化的研究意义：

• 了解细胞增殖与衰老的分子机制；
• 为研究治疗肿瘤、控制肿瘤细胞增殖以及器官移植等奠定基础；
• 可使传代困难、增殖慢、易衰老的细胞获得永生，获得更多的细胞资源。

1、永生化之病毒工具

备注：SV40 Large T (tsA58)：SV40大T抗原的温度敏感突变株tsA58表达的蛋白在允许温度（permissive temperature）33℃下有活性，在非允许温度（non-permissive temperature）39℃下失活，因而用SV40 Large T (tsA58) 永生化的细胞系具有永生化和温控性双重特性。

2、永生化之端粒

3、永生化之原癌基因

4、永生化之抑癌基因

永生化细胞（Immortalized Cells）

来源于脱离了正常衰老死亡过程并获得持续分裂能力的原代细胞，具有易于培养和传代、均一性等优点。细胞永生化的方法包括端粒酶激活、病毒基因转染、原癌基因激活或抑癌基因抑制等，通过重组慢病毒感染使细胞过表达猴肾病毒SV40 T抗原或人端粒逆转录酶hTERT基因是较常用的两种细胞永生化的方法。

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来源：飞凡检测认证