mRNA加帽率检测分析服务

mRNA作为一种治疗性或预防性的药物产品，结构如图1所示，5’端帽子结构有2个最主要的功能：

一：在细胞中招募蛋白翻译机器，使得mRNA翻译表达出特定生物学功能的蛋白质。

二：提升mRNA稳定性，避免被细胞内的核酸内切酶降解。

可以保持mRNA在翻译、拼接、聚腺苷酸化以及从细胞核导出等各环节中稳定性，并赋予体外转录mRNA对5’到3’外切核酸酶的抗性，从而延长mRNA的半衰期，因此检测mRNA的加帽效率毫无疑问是mRNA生产工艺质量分析里面最关键的指标之一。

图1. mRNA结构示意图

1.基于RNase H的mRNA加帽率分析技术流程

质谱是目前检测加帽率最有效的途径，且质谱平台在生物制药领域具有一定的通用性。

明捷医药已建立mRNA加帽率检测的完整能力，包括起始的探针设计、样品前处理、LC-MS检测、数据分析和方法验证等，检测流程见图2。

图2.RNase H酶介导的加帽率检测流程

案例分析

1.优化实验过程提高切割位点的特异性

基于RNase H切割得到的5’末端序列，是当前工艺中常用的加帽率检测法，也是美国药典（USP）推荐的加帽率检测方法。但有报道显示，RNase H切割位点的专一性较差，影响结果的重复性。为解决这一问题我们进行了相关的方法优化，以提高检测方法的可靠性。我们有完整的优化流程，如图3 所示，a图中加帽峰去卷积后得到的数据中显示RNase H切割位点的特异性较差，b图中显示经过优化RNase H切割位点的特异性明显提高。

图3. a.表示未经方法优化酶切得到的去卷积图

b.表示经过方法优化后酶切得到的去卷积质谱图

2.不同工艺加帽率检测结果

目前加帽方式用的比较多的是酶法加帽和共转录加帽法，如图4所示，我们对于两种加帽方法检测到的图谱和数据如下所示。

图4. 酶法加帽和共转录加帽法示意图

3.检测方法的准确性评估

加帽方法的准确性的评估，采用在加帽率样品中加入一定量未加帽的样品，加标回收后，计算准确度，符合标准。

我们在mRNA加帽率检测分析中有丰富的经验，从最初的探针设计、前处理、LC-MS检测和数据分析以及方法验证有整体的解决方案，具备完整的mRNA加帽率检测的能力。

来源：明捷医药