详解替米考星ELISA检测试剂盒

原理及用途

深圳艾瑞斯生产的替米考星ELISA检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法，检测组织、肝脏、蜂蜜、鸡蛋和牛奶中的替米考星含量。试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的替米考星和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗替米考星抗体，再与酶标记物形成抗原抗体复合物，用TMB底物显色，样本吸光度值与其替米考星含量成负相关，与标准曲线比较乘以样本稀释倍数即可得出样本中替米考星的残留量。

技术指标

1 试剂盒灵敏度：0.5ppb(ng/ml)

2 反应模式：25℃，30min～15min

3 检测下限：

动物组织（高检测限） ……… 0.5ppb

动物组织（低检测限） ……… 10ppb

肝脏（鸡肝、 猪肝）………… 10ppb

蜂蜜…………………………… 1ppb

鸡蛋、牛奶…………………… 5ppb

4 交叉反应率：

替米考星 ………………………100%

泰乐菌素………………………… 1%

5 样本回收率：

动物组织（高检测限）……… 90%±20%

动物组织（低检测限）……… 90%±20%

肝脏（鸡肝、鸭肝、猪肝）… 75%±15%

蜂蜜…………………………… 95%±25%

鸡蛋、牛奶…………………… 95%±25%

替米考星ELISA检测试剂盒

样本前处理

1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

2 配液：

配液 1: 0.1M (PH=10.6) CB 缓冲液

称取 0.932g 无水碳酸钠和 0.1g 碳酸氢钠加入 100ml 去离子水溶解混匀。

配液 2: 0.5M (PH=10.6) CB 缓冲液

称取 4.66g 无水碳酸钠和 0.5g 碳酸氢钠加入 100ml 去离子水溶解混匀。

配液 3:复溶液

1 份 2× 复溶液 +1 份去离子水混匀，即可得到复溶液。

配液 4: 牛奶、鸡蛋稀释液

取复溶液与甲醇按 19:1 体积比混合，即（ 19 份复溶液 +1 份甲醇）。

配液 5: 洗涤工作液

用去离子水将 20× 浓缩洗涤液按 1 ： 19 体积比进行

稀释（ 1 份 20× 浓缩洗涤液 +19 份去离子水）用于酶标板的洗涤， 洗涤工作液在 4 ℃（ 39.2 ℉）环境可保存一个月 。

高检测限样本前处理方法

动物组织（猪肉、 鸡肉、 牛肉、 羊肉、 鱼、 虾）

1、称取 2.0 ± 0.05g 均质后的组织样本至 50ml 聚苯乙烯

离心管中，分别加入 2ml 0.1M （ PH=10.6 ） CB( 配液 1)

和 8ml 乙酸乙酯，用涡动仪涡动 3min ，3000r/min

室温离心 5min ；

2、取 4ml 上层有机相至 10ml 洁净干燥玻璃管中，于

50-60 ℃水浴氮气流下吹干；

3、 加入 1ml 正已烷，用涡旋仪涡动 30s ，再加入 1ml

复溶液， 用涡旋仪涡动 30s ， 3000 r/min 室温离心

5min ；

4、除去上层，取下层 50μl 用于分析。

样本稀释倍数：1 检测下限：0.5ppb

低检测限样本前处理方法

动物组织（猪肉、 鸡肉、 牛肉、 羊肉、 鱼、 虾）

1、 称取 1.0 ± 0.05g 均质后的样本至 50ml 聚苯乙烯离心

管中，加入 4ml 洗涤工作液（配液 5 ），用涡动仪

涡动 3min ， 3000 r/min室温离心 5min ；

2、 取 200μl 上层清液，再加入 600μl复溶液，用涡旋仪涡动 30s ，混匀；

3、取 50μl 用于分析。

样本稀释倍数：20 检测下限：10ppb

肝脏（鸡肝、鸭肝、猪肝）

1、称取 1.0 ± 0.05g 均质后的样本至 50ml 聚苯乙烯离心管中， 分别加入 2ml 0.5M （ PH=10.6 ） CB( 配液 2) 和8ml 乙酸乙酯，用涡动仪涡动 3min ，3000 r/min 室温离心 5min ；

2、取 2ml上层有机相至 10ml 洁净干燥玻璃管中，于50-60 ℃水浴氮气流下吹干；

3、加入 1ml 正已烷，用涡旋仪涡动30s，再加入1ml复溶液，用涡旋仪涡动 30s，3000 r/min 室温离心5min；

4、 除去上层，取 100μl下层加 400μl复溶液，用涡旋仪涡动 30s，混匀；

5、取 50μl 用于分析。

样本稀释倍数：20 检测下限：10ppb

蜂蜜

1、称取 2.0 ± 0.05g 蜂蜜样本至 50ml 聚苯乙烯离心管中， 分别加入 2ml 0.1M （ PH=10.6 ） CB( 配液1），和 8ml乙酸乙酯，用涡动仪涡动 3min ， 3000g 室温离心 5min ；

2、取 2ml 上层有机相至 10ml 洁净干燥玻璃管中，于 50-60 ℃水浴氮气流下吹干；

3、加入 1ml复溶液 ，用涡旋仪涡动 30s ，混匀；

4、取 50μl 用于分析。

样本稀释倍数：2 检测下限：1ppb

鸡蛋

1、用均质器低速均质鸡蛋样本；

2、取 100μl 均质后的鸡蛋样本加 900μl 鸡蛋稀释液 ( 配液 4) ，用涡旋仪涡动 30s ，混匀；

3、取 50μl 用于分析。

样本稀释倍数：10 检测下限：5ppb

牛奶

1、取 100μl 鲜牛奶样本；

2、加入 900μl 牛奶稀释液 ( 配液 4) ，用涡旋仪涡动 30s ，混匀；

3、取 50μl 用于分析。

样本稀释倍数：10 检测下限：5ppb

来源：深圳艾瑞斯仪器