流式细胞检测实验 FCM 样本处理

1、 培养的细胞

上海：消化分离收集后，用 PBS 清洗，洗去刺激药物或培养基后，重悬于培养基或 PBS，4℃ 运输，不可干冰运输（当天实验，适合上海本地）外地细胞冻存：

1、从培养箱中取出培养皿/板，镜下观察贴壁情况

2、确认贴壁后，放入操作台，贴壁轻轻吸去上清，不触碰皿/板底

3、加入适量的含有胰酶的培养液（以覆盖底部为主），消化 1-2min（可选）

4、镜下观察细胞情况，确认细胞形态略有变化，吸去消化液

5、用适量新鲜培养液，贴壁轻柔吹打细胞，至细胞从板底脱落

6、吸取含有细胞的培养液至细胞保存管中，离心，1000rpm/10min

7、弃去上清，用适量含有 5 左右的 DMSO 重悬（可用细胞保存液）

8、放入提前放在 4℃的细胞保存盒（加入异丙醇）中，4℃放置 30min，依次放入-20℃中30min，再放入到-80℃中 1h，最后转入液氮罐中保存

货号名称规格备注abs9412ES/iPS细胞冻存液100mlSerum-Freeabs9413无血清细胞冻存液（治疗级）100mlSerum-Freeabs9417无血清细胞冻存液（科研级）100mlSerum-Freeabs47047375胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红100ml不含酚红abs47014937Trypsin (0.25%), Phenol Red100mlPhenol Red

2、组织

用 PBS 清洗干净后，用美天旎的保护液（可放置 48 小时）4℃保存，不可干冰以及-80℃

3、全血收集

用紫色抗凝管收集血液样本，收集后，上下颠倒，充分混匀样本和抗凝剂，4℃运输

4、PBMC 提取

（1） 取抗凝全血若干体积，和等体积 1*PBS 对半稀释，室温下吹打混匀

（2） 先在离心管底部铺上等稀释血量体积的淋巴细胞分离液，沿管壁（45°）缓缓加入稀释血，让稀释后的血铺在淋巴细胞分离液上，尽量不让血液进入淋巴细胞分离液。

（3） 室温，2000rpm，离心 20 分钟，加速度 0，减速度 0

（4） 可见离心后液体分为四层，从上到下一次为：血浆和血小板，单个核细胞（白膜层），分离液，多形核白细胞和红细胞。用将枪头插入分层中，只吸取灰色的单个核细胞层

（5） 所得 PBMC 悬液用 3-5 倍的 PBS 洗涤 2 次，每次离心 2000rpm，20min，若有红细胞，可以加适量裂红液进行裂红，裂红时间需根据红细胞量来确认裂红时间

（6） 提取PBMC 后，-80℃冻存，干冰运输。

本文摘自：FCM 样本处理

来源：乐备实LabEx