多糖的分离与纯化
多糖的提取
多糖提取方法有热水浸提法、酸提、碱提、有机溶剂提取、酶法提取等,常以微波和超声波辅助强化。水溶性多糖可采用水提法,水不溶性多糖一般用碱或酸法提取。
1.三氯乙酸法 (TCA法)配制质量浓度为l%的粗多糖溶液,加入1%TCA,振摇 20min后静置 30min,然后离心除去沉淀,取上清液重复以上操作2次
2.氯化钙法配制质量浓度为1%的粗多糖溶液,调节pH值为8一9,加热至85℃,加氯化钠使其浓度为5%,搅拌,冷却,离心。
3.盐酸法配制质量浓度为l%的粗多糖溶液,向溶液中逐滴加入 2mol.l一1的盐酸溶液,调pH值为3,4oC放置12h,离心。
二、分离与纯化
1、DEAE-52离子交换柱层析
将提取得到的蛹虫草粗多糖分别配制成浓度为 10 mg/mL 溶液后用阴离子交换柱进行层析,依次用蒸馏水、0.1 mol/L、0.2 mol/L 和 0.3 mol/L NaCl 溶液洗脱,用苯酚-硫酸法跟踪检测,
2、Sephadex G-100 凝胶柱层析
将经 DEAE-52 柱层析后所得到的 4 种酸性多糖组分,再利用 Sephadex G-100 层析柱的分子筛作用进行进一步纯化。
三、多糖的现状与前景
目前,全世界微生物多糖年需求量约为80- 100万吨,工业年产值可达50- 100亿美元 世界上微生物多糖的产量和年增长量均在 10%以上,特别是一些新型多糖年增长量在30%以上 。
我国在该领域的研究相对起步较晚,对其研究尚处于初级阶段,大部分集中在食品 食品添加剂和造纸应用等方面,在生物医用材料上的开发应用报道较少。
在现有基础上更广泛的开展微生物多糖应用基础的研究,拓展其应用领域;根据不同用途,研究下游分离提取工艺,降低生产成本,开发不同规格的产品系列,满足多元化市场需求,具有积极的现实意义。
但是如何改进适于工业化生产的提取、分离、纯化方法以提高资源的利用率,节省能源,也显得极为重要。
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